Banca de QUALIFICAÇÃO: AMANDA FERNANDES DE MEDEIROS
Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.DISCENTE : AMANDA FERNANDES DE MEDEIROS
DATA : 28/09/2017
HORA: 09:00
LOCAL: Sala A do Departamento de Nutrição.
TÍTULO:
Caracterização bioquímica e função do inibidor de tripsina purificado da semente de tamarindo em modelo de obesidade experimental
PALAVRAS-CHAVES:
Tamarindus indica L., antitríptica, Kunitz, CCK, leptina.
PÁGINAS: 72
RESUMO:
A obesidade é uma das Doenças Crônicas Não Transmissíveis de maior impacto na saúde pública. A semente de tamarindo (Tamarindus indica L.) vem sendo estudada por possuir inibidor de tripsina, e dentre os atributos relacionados à esse inibidor parcialmente purificado (ITT) tem-se a sua relação com a saciedade, por aumentar colecistocinina (CCK) plasmática em animais eutróficos e seu efeito na redução da concentração circulante de leptina em animais com obesidade, entretanto sem atuar sobre o aumento plasmático de CCK. Neste estudo o ITT foi purificado caracterizado e avaliado quanto as suas propriedades frente aos hormônios CCK e leptina em ratos Wistar com obesidade. Assim, para purificação e caracterização deste inibidor foi realizado fracionamento do extrato bruto proteico com sulfato de amônio, cromatografia de afinidade Tripsina-Sepharose e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (HPLC); determinação da massa molecular por MS-ESI; sequenciamento parcial por MALDI-TOF com ISD; ensaio de estabilidade de temperatura e pH; estimativa dos parâmetros de especificidade; eletroforese bidimensional (2-DE) e dosagem de CCK e leptina plasmática em ratos com obesidade, por ELISA, submetidos à gavagem oral (730 µg/kg) do inibidor de tripsina purificado (ITTp) comparando-os à ratos com obesidade sem tratamento. Desse modo, o ITT foi purificado por HPLC obtendo-se um único pico proteico, denominado ITTp. Porém ao refinar o método, obteve-se a partir do ITTp outros dois picos proteicos, asfrações: Fr 1 e Fr 2 do ITTp. As Massas moleculares protonada dessas frações proteicas foram de [M+H]+ = 19594,6895 Da e de [M+H]+ = 19577,1732 Da, respectivamente. Após redução e alquilação estimou-se a presença de 4 cisteínas para Fr 1 e Fr 2. As sequências parciais obtidas para Fr 1 e Fr 2 foram de 53 resíduos de aminoácidos identificados e com exatamente a mesma sequência para ambas. O ITTp foi resistente à variação de temperatura, reduzindo cerca de 30% de sua atividade antitríptica com 100 ºC e resistente aos extremos de pH. Para o ITTp estimou-se a IC50 de 2,7 x 10-10 Mol e a Ki de 2,9 x 10-11 Mol. A eletroforese bidimensional do ITTp revelou spots com pontos isoelétrico entre pH 5 e 6, além de um spot próximo de pH 8. Dessa forma, foi constatado que se trata de um inibidor de tripsina da família Kunitz. No experimento in vivo foi confirmada a ação de ITTp sobre a redução de leptina plasmática, mas sem efeito sobre CCK em animais com obesidade, como já atestado em estudos prévios com o ITT. O conhecimento bioquímico desta molécula demonstrados neste estudo e os experimentos in vivo afim de confirmar o efeito sobre CCK e leptina deste inibidor de tripsina purificado é um feito inédito, promissor e fornece informações essenciais para uma biomolécula forte candidata à aplicação biotecnológica.
MEMBROS DA BANCA:
Externo ao Programa - 2646462 - BRUNA LEAL LIMA MACIEL
Externo ao Programa - 1492900 - CICERO FLAVIO SOARES ARAGAO
Presidente - 1149356 - ELIZEU ANTUNES DOS SANTOS