Banca de DEFESA: TICIANA MARIA LUCIO DE AMORIM

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: TICIANA MARIA LUCIO DE AMORIM
DATA: 29/04/2014
HORA: 09:00
LOCAL: Sala Carl Peter von Dietrich
TÍTULO:

CLONAGEM E EXPRESSÃO HETERÓLOGA DE UM INIBIDOR DE QUIMOTRIPSINA DE Erythrina velutina – AVALIAÇÃO DE ATIVIDADES ANTICOAGULANTE E ANTI-INFLAMATÓRIA.

PALAVRAS-CHAVES:

Mulungu. Inibidor recombinante. Anticoagulante. Anti-inflamatório.

PÁGINAS: 88
GRANDE ÁREA: Ciências Biológicas
ÁREA: Bioquímica
RESUMO:

Proteinases são enzimas amplamente distribuídas em diferentes organismos e que desempenham as mais diversas funções, inclusive no desenvolvimento de doenças. Dessa forma, os inibidores de proteinases de plantas vêm sendo estudados como possíveis ferramentas no tratamento destas doenças, devido às suas atividades relacionadas com os processos de coagulação, inflamação e cancerígenos. O inibidor recombinante foi produzido após a construção de uma biblioteca de cDNA. A clonagem foi feita por meio do vetor pCR2.1 e a expressão, utilizando o vetor pET32a, foi feita em células de Escherichia coli. As células foram mantidas em meio LB e após indução da expressão este material foi submetido a procedimentos de lise celular e o produto foi aplicado em uma coluna de afinidade de Níquel. Em seguida, as proteínas ligadas à coluna foram digeridas por uma protease e aplicadas em uma coluna de afinidade de Quimotripsina-Sepharose, obtendo-se o inibidor purificado, denominado recEvCI. Em eletroforese, o inibidor recombinante apresentou uma massa molecular de, aproximadamente, 17kDA,  e reduziu a atividade de quimotripsina com uma taxa de inibição de 100%. A proteína foi susceptível a variações de temperatura, entretanto, demonstrou alta estabilidade quando submetido a variações de pH e sob condições redutoras, mantendo sua atividade inibitória em torno de 80%.   recEvCI  reduziu a atividade de elastase neutrofílica em 81%, in vitro, não inibindo tripsina. Quando avaliadas suas aplicações farmacológicas, esta proteína aumentou o tempo de formação de coágulo e reduziu a liberação de óxido nítrico, consequentemente, a ativação de macrófagos. Estes resultados indicam que recEvCI pode ser utilizado com uma nova ferramenta no combate à doenças, como fibrose e doenças inflamatórias.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1549705 - ADRIANA FERREIRA UCHOA
Externo à Instituição - CELINA MARIA PINTO GUERRA DORE - F.M.Nassau
Externo ao Programa - 1346635 - JANEUSA TRINDADE DE SOUTO
Interno - 1513597 - JOAO PAULO MATOS SANTOS LIMA
Interno - 151.364.691-53 - MARIA FÁTIMA GROSSI DE SÁ - EMB/CENARGEN