Banca de DEFESA: YAMARA ARRUDA SILVA DE MENEZES

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: YAMARA ARRUDA SILVA DE MENEZES
DATA: 04/07/2013
HORA: 09:00
LOCAL: Sala do CONSEC/CCS
TÍTULO:

EXTRAÇÃO E ANÁLISE DE PROTEÍNAS DA ESPÉCIE “
Cnidoscolus urens (L.) Arthur ”


PALAVRAS-CHAVES:

Cnidoscolus urens, Euphorbiaceae, cisteíno proteases, caracterização enzimática, atividade fibrinogenolítica, atividade procoagulante.


PÁGINAS: 106
GRANDE ÁREA: Ciências da Saúde
ÁREA: Farmácia
SUBÁREA: Análise e Controle de Medicamentos
RESUMO:

A extração, caracterização química e estrutural de uma grande diversidade de
compostos derivados de plantas tem sido uma fonte importante de moléculas
bioativas. Grande diversidade de proteases tem sido isoladas no reino vegetal, com
inúmeras aplicações farmacológicas/biotecnológicas. Dentre as proteases isoladas
de plantas, estão as fibrinogenolíticas, com relevante aplicação no tratamento de
distúrbios na cascata da coagulação, além do potencial uso como ferramenta em
laboratórios clínicos. Diversas enzimas fibrinogenolítitas tem sido identificadas e
isoladas de venenos de serpentes, porém são escassos os estudos sobre enzimas
de plantas com esta aplicação. Neste trabalho, além de avaliar os efeitos do extrato
protéico de Cnidoscolus urens (L.) Arthur, pertencente à família Euphorbiaceae, na
cascata de coagulação, também se investiga a presença de atividade antimicrobina
e caracteriza a atividade proteolítica detectada neste extrato, tendo como objetivo
determinar sua potencial aplicação farmacológica/biotecnológica. Desse modo,
extratos protéicos brutos obtidos das folhas de C. urens em tampão Tris-HCl 0,05M,
NaCl 0,15M, pH 7,5, foram precipitados em diferentes concentrações de acetona, e
avaliados quanto a presença de atividade proteolítica em azocaseína e fibrinogênio.
A fração mais ativa (F1.0) nestes testes foi escolhida para realização de avaliação
de atividade biológica e caracterização bioquímica. As cadeias Aα e Bβ foram
completamente clivadas na concentração de 0.18 µg/µL de proteína da fração em 4
minutos. A atividade fibrinogenolítica apresentou inibição total em presença de E-64
e parcial em presença de EDTA. A fração demonstrou atividade coagulante sobre o
plasma e reduziu o tempo de tromboplastina parcial ativada, demonstrando atuar
sobre os fatores da via intrínseca e comum da coagulação, não exercendo efeitos
sobre o tempo de protrombina. A atividade fibrinolítica sobre o coágulo de plasma foi
detectado apenas em SDS-PAGE em concentrações elevadas da fração, e não foi
observada atividade defibrinogenante. Apesar de várias proteases de plantas e
animais peçonhentos serem classicamente tóxicas, a fracção F1.0 não expressou
atividade hemorrágica nem hemolítica. A fração F1.0 também não demonstrou
atividade antimicrobiana. Em avaliação da atividade proteolítica sobre a azocaseína,
o pH ótimo de reação foi 5.0, e a temperatura ótima igual a 60ºC. A atividade
enzimática demonstrou ser sensível à presença dos sais testados, com inibição para
todos os compostos. O tensoativo triton não influenciou a atividade enzimática,
porém o tween-20 e SDS inibiram tal atividade. Em presença de agentes redutores
ocorreu aumento da atividade enzimática, característica típica de enzimas
pertencentes à classe das cisteíno proteases. Diversas bandas protéicas com
atividade proteolítica foram detectadas em zimograma, na região de elevada massa
molecular, que foram inibidas por E-64. Neste trabalho, foi revalado que C. urens
apresenta em sua constituição cisteíno-proteases com atividade fibrinogenolítica e
procoagulante, que podem ser isoladas, com potencial aplicação em distúrbios
hemorrágicos, como trombolítico e em laboratório clínico.



MEMBROS DA BANCA:
Interno - 2378605 - CRISTIANE FERNANDES DE ASSIS
Presidente - 1544647 - MATHEUS DE FREITAS FERNANDES PEDROSA
Externo à Instituição - WOGELSANGER OLIVEIRA PEREIRA - UERN
Notícia cadastrada em: 21/06/2013 14:55
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