Banca de QUALIFICAÇÃO: MARCOS ANTONIO LEAL FERREIRA
Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.DISCENTE: MARCOS ANTONIO LEAL FERREIRA
DATA: 26/08/2010
HORA: 08:30
LOCAL: Sala de aula do PPGCSa
TÍTULO:
Conservação e desenvolvimento in vitro de folículos ovarianos pré-antrais em caprinos
PALAVRAS-CHAVES:
Reprodução assistida; folículos ovarianos pré-antrais; caprinos
PÁGINAS: 11
GRANDE ÁREA: Ciências Biológicas
ÁREA: Zoologia
RESUMO:
Os folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) representam cerca de 90% da população folicular (SAUMANDE, 1991) e são responsáveis pela constante renovação de folículos antrais no ovário (IRELAND, 1987). No entanto, cerca de 99,9% dos folículos de um ovário não ovulam, mas sofrem um processo fisiológico conhecido como atresia, que causa a morte do folículo, por via degenerativa (SAUMANDE, 1981) e/ou apoptótica (FIGUEIREDO et al., 1995). Com o intuito de minimizar a grande perda folicular que ocorre naturalmente in vivo, vem sendo desenvolvida a biotécnica de MOIFOPA. Esta biotécnica visa desenvolver protocolos eficientes para a conservação e o isolamento dos FOPA do ambiente ovariano acompanhado do cultivo in vitro até o estágio de maturação oocitária. No presente trabalho, buscamos contribuir com a biotécnica de MOIFOPA de duas maneiras: desenvolvendo e avaliando protocolos de conservação de FOPA caprinos in situ e isolados; e promovendo a ativação de FOPA caprinos em sistemas de cultivo in vitro. No tocante a conservação dos FOPA, nós investigamos o efeito do ácido 3-indol-acético (IAA) na preservação de FOPA caprinos in situ e isolados. Para tanto, foram utilizados 4 pares de ovários de cabras adultas sem raça definida. De cada par ovariano, um ovário foi destinado ao isolamento mecânico. Uma amostra da suspensão de FOPA isolados obtida foi imediatamente analisada (tratamento 1 – controle). O outro ovário foi cortado em pequenos fragmentos. Os FOPA isolados e os fragmentos ovarianos foram conservados em TCM 199+ ou TCM 199+ + IAA a 4oC, 20oC ou 39oC por 4h, 12h ou 24 h. Após o período de conservação, os fragmentos ovarianos foram submetidos ao isolamento folicular. No controle e após o período de conservação, a viabilidade folicular foi avaliada com azul de tripan e pela técnica fluorescência. Os FOPA conservados isolados a 4oC em TCM 199 por 4h e em TCM 199+ + IAA por 4h e 12 h; e a 20oC em TCM 199+ + IAA for 4 h mantiveram a viabilidade folicular semelhante ao controle. Os FOPA conservados em pequenos fragmentos de tecido ovariano, preservaram em ambas as soluções a 4oC por até 24 h e em TCM 199+ + IAA a 20oC por 4 h, a percentagem de FOPA viáveis similar ao do controle. No que concerne ao cultivo in vitro, nós avaliamos o efeito do ácido IAA na ativação de FOPA caprinos. Foram utilizados 4 pares de ovários de cabras adultas sem raça definida. Cada par ovariano foi dividido em 23 fragmentos. Um fragmento foi fixado para histologia clássica e outro destinado ao procedimento de isolamento folicular. Os fragmentos restantes foram cultivados em 1,0 mL de Meio Essencial Mínimo (MEM) ou MEM acrescido de IAA nas concentrações de 10, 40, 100, 500 ou 1000 ng/mL. O cultivo foi realizado a 39°C, em estufa com 5% de CO2, durante 1, 3 e 5 dias. Após o cultivo foi avaliada a integridade histológica e a viabilidade dos FOPA. A adição de 100 ng/ml de IAA ao MEM possibilitou um aumento significativo de folículos de transição no terceiro dia de cultivo, caracterizando a ativação folicular. Além disso, nesta concentração foi obtida a manutenção da integridade histológica dos FOPA até o quinto dia de cultivo. O teste de viabilidade confirmou os resultados da histologia clássica. Este estudo mostrou que o IAA na concentração de 100 ng/mL favorece a conservação de FOPA caprinos in situ ou isolados a 4o e a 20oC e que o IAA pode promove a ativação de FOPA caprinos cultivados in vitro.
MEMBROS DA BANCA:
Interno - 1348383 - GEORGE DANTAS DE AZEVEDO
Externo ao Programa - 1219008 - MAGDA MARIA GUILHERMINO
Presidente - 346130 - MARIA BERNARDETE CORDEIRO DE SOUSA