Banca de DEFESA: GERCIANE SILVA DE OLIVEIRA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : GERCIANE SILVA DE OLIVEIRA
DATA : 30/08/2022
HORA: 08:00
LOCAL: Plataforma digital GoogleMeet: https://meet.google.com/vgd-wqrn-hbe
TÍTULO:

AVALIAÇÃO DA GENOTOXICIDADE DO INIBIDOR DE TRIPSINA ISOLADO DE SEMENTE DE TAMARINDO (Tamarindus indica L.) E DO POTENCIAL ANTIBACTERIANO IN VITRO E IN SÍLICO DE SEUS PEPTÍDEOS DERIVADOS

PALAVRAS-CHAVES:

Inibidor de protease. Peptídeos antimicrobianos. Simulação de Dinâmica Molecular.

PÁGINAS: 109
RESUMO:

As infecções bacterianas têm se tornado uma preocupação global. Em virtude disso, a busca por agentes terapêuticos naturais e seguros com ação antibacteriana, tais como os inibidores de proteases, é crescente. No presente estudo avaliou-se a genotoxicidadedo inibidor de tripsina isolado de sementes de tamarindo (ITT) e investigou-se in vitro e in sílico o efeito antibacteriano dos seus peptídeos derivados. Para tal, inicialmente, o ITT foi obtido por cromatografia de afinidade tripsina-Sepharose 4B e identificado. A segurança biológica foi avaliada por meio da citotoxicidade do ITT pelo método do MTT e genotoxicidade por meio do CBMN em células CHO-K1, utilizando 0,3 e 0,6 mg/mL. O padrão de digestão do ITT foi estabelecido por meio da digestão simulada e hidrólise proteolítica in vitro, simulando as fases oral, gástrica e intestinal conforme protocolo da INFOGEST, no entanto, para a hidrólise não foram utilizados os fluidos da digestão. Para determinação da susceptibilidade enzimática o ITT digerido/hidrolisado foi monitorado por análises de massa molecular e atividade inibitória sobre a tripsina. Foi testada a atividade anti-bacteriana in vitro para o ITT hidrolisado. Para a clivagem in sílico foi utilizado o modelo teórico do ITT, número 56, e conformação número 287 (ITTp 56/287) sendo submetido a clivagem teórica com a combinação de tripsina e quimotripsina (determinado pela digestão simulada), utilizando a ferramenta de análise PeptideCutter do servidor ExPASy. Posteriormente, para selecionar o peptídeo com potencial antibacteriano, esses foram alinhados com o ITTp 56/287 para identificação das posições dos resíduos de aminoácidos utilizando o servidor CLUSTAL W e após selecionar o peptídeo com maior potencial antibacteriano seguiu-se para a dinâmica molecular (DM) usando o pacote GROMACS. O ITT (0,3 e 0,6 mg/mL) não causou citotoxicidade e nem tampouco genotoxicidade nas células (p<0,05), quando digerido/hidrolisado in vitro se manteve íntegro na fase oral e gástrica, enquanto as enzimas intestinais (tripsina e quimotripsina) foram eficazes em clivar o ITT. O ITT hidrolisado (7mg/mL) avaliado quanto a atividade antibacterina in vitro contra E. faecalis, S. aureus e S. epidermidis, nas concentrações testadas não apresentou atividade bacteriostática ou bactericida. Na análise in sílico o Peptídeotripquimo59 (TVSQTPIDIPIGLPVR) apresentou resíduos de aminoácidos anfipáticos, hidrofobicidade 0,636 e estrutura α- hélice. Na DM o Peptídeotripquimo59 apresentou energia potencial de interação (EPI) de -518,08 kcal.mol-1 com a membrana de bactérias Gram-positiva e os resíduos treonina e arginina apresentaram as melhores EPI. Portanto, os resultados trazem novas perspectivas de estudos e aplicações para o ITT e seus peptídeos derivados sobre a atividade antibacteriana.

 

 

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 2578619 - ANA HELONEIDA DE ARAUJO MORAIS
Interna - 2378605 - CRISTIANE FERNANDES DE ASSIS
Externa à Instituição - RICHELE JANAINA ARAUJO MACHADO - UNICHRISTUS