EFEITO DA CONDIÇÃO NUTRICIONAL E DO PROTOCOLO DE FOTOBIOMODULAÇÃO NA VIABILIDADE E PROLIFERAÇÃO IN VITRO DE CÉLULAS PRÉ-OSTEOBLÁSTICAS MURINAS
Cultivo celular; osteoblastos; laser; proliferação celular.
O laser de baixa intensidade (LBI) tem sido utilizado para induzir a proliferação in vitro de diversos tipos celulares, porém alguns dados dos protocolos experimentais, especialmente relacionados ao cultivo celular e à irradiação, ainda precisam ser padronizados. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da condição nutricional do meio e dos parâmetros de irradiação na viabilidade e proliferação de pré-osteoblastos murinos. Células da linhagem comercial MC3T3-E1 foram mantidas em condições normais de cultivo (meio αMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino) ou carenciamento nutricional (meio αMEM sem soro) e irradiadas ou não (controle) com laser diodo InGaAlP, nos comprimentos de onda de 660 nm (vermelho) ou 790 nm (infravermelho), com doses de 1, 4 ou 6 J/cm², em dose única no modo de ação contínuo. A viabilidade e a proliferação celular foram avaliadas nos intervalos de 24, 48 e 72 h após a irradiação, através dos ensaios de redução do Alamar blue. O ciclo celular e os eventos relacionados à morte celular foram avaliados pela marcação por iodeto de propídio (PI) e pelo ensaio da Anexina V/PI, respectivamente, através da citometria de fluxo. Os dados mostraram que nas células cultivadas com nutrição normal (10% FBS), não houve diferença significativa (p>0,05) na viabilidade e proliferação celular entre os diferentes protocolos de irradiação. Já nos experimentos conduzidos sob carenciamento nutricional (sem FBS), observou-se que o laser infravermelho, com dose de 6 J/cm2, promoveu um aumento significativo (p<0.05) na viabilidade e proliferação celular, em comparação com o grupo controle, no intervalo de 72h. Os dados foram confirmados nos ensaios de avaliação do ciclo celular e dos eventos de morte celular (Anexina V/PI). Em conjunto, estes resultados sugerem que a fotobiomodulação in vitro apresenta resultados mais consistentes em células ósseas submetidas a condição de estresse, o que demanda atenção para a simulação destas condições nos estudos com laserterapia nos modelos in vitro de doenças ósseas e nos experimentos in vitro com aplicação de fotobiomodulação para a engenharia tecidual óssea.