Banca de DEFESA: DELANNE CRISTINA SOUZA DE SENA FONTINELE

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: DELANNE CRISTINA SOUZA DE SENA FONTINELE
DATA: 08/09/2011
HORA: 14:00
LOCAL: Sala de reuniões do Centro de Biotecnologia UFRN
TÍTULO:

Identificação de genes em Chromobacterium violaceum Relacionados à Resposta ao Estresse.

PALAVRAS-CHAVES:

HolB; Polimerase III; Mutagênese; Resposta ao Estresse; β-Proteobacteria

PÁGINAS: 88
GRANDE ÁREA: Ciências Biológicas
ÁREA: Genética
RESUMO:

O seqüenciamento do genoma da espécie Chromobacterium violaceum identificou um cromossomo simples circular de 4.8 Kb, onde aproximadamente 40% das ORFs encontradas são classificadas como hipotéticas conservadas ou hipotéticas. Algumas regiões gênicas de interesse biotecnológico vêm sendo caracterizadas, como por exemplo, genes de reparo de DNA. Diante disso, objetivou-se identificar genes de  C. violaceum envolvidos com mecanismos de reparo de DNA e manutenção da integridade genômica. Foram realizados ensaios de complementação funcional com uma biblioteca genômica de  C. violaceum transformada na cepa DH10B de Escherichia coli deficiente em RecA. Cinco clones foram selecionados após ensaios com luz UVC. No clone PLH6A foram identificadas quatro ORFs (CV_3721 a 3724). Duas ORFs, CV_3722 e  CV_3724, foram subclonadas e uma atividade sinérgica de complementação foi observada. O ensaio de mutagênese com rifampicina após tratamento de luz UVC mostrou alta freqüência de mutagenicidade para a ORF CV_3722 (Pol III δ’ subunit). Dessa forma, propomos que a subunidade  δ’ de C. violaceum pode agir em DH10B na síntese translesão utilizando Pol IV em uma via  RecA independente. A ocorrência de um operon foi
confirmada usando cDNA de  C. violaceum em um ensaio de RT-PCR. Adicionalmente, foi observada a indução do operon após tratamento com UVC, dessa forma, esse operon composto pelas quatro ORFs foi identificado estar associado a resposta ao estresse em  C. violaceum. Em ensaios de curva de crescimento os outros quatro clones foram capazes de complementar a função na dose de 5 J/m2. E em ensaios de mutagenicidade três deles apresentaram freqüências de mutação com diferenças significativas em relação ao controle (DH10B), demonstrando que de alguma forma eles estão envolvidos com a resposta ao estresse em C. violaceum e manutenção da integridade genômica. Os resultados obtidos contribuem para um melhor conhecimento da genética desta espécie. 

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1149647 - LUCYMARA FASSARELLA AGNEZ LIMA
Interno - 2195251 - HUGO ALEXANDRE DE OLIVEIRA ROCHA
Externo ao Programa - 1549705 - ADRIANA FERREIRA UCHOA
Externo à Instituição - KERONNINN MORENO DE LIMA BESSA - USP