Produção e purificação de enzimas quitosonolíticas produzidas por microorganismos isolados no Nordeste Brasileiro.
B. cereus, cromatografia em leito expandido, quitosanase.
Uma cepa produtora de quitosanase foi isolada e identificada como Bacillus cereus C-01, a partir disso a caracterização bioquímica e a purificação da enzima foram estudadas. As condições para a purificação quitosanase usando Adsorção em Leito Expandido (ALE) foram otimizadas estatisticamente. As variáveis que influenciaram significativamente os parâmetros fator de purificação (P) e rendimento da enzima (Y) foram avaliadas através de Planejamento Composto Central. As análises estatísticas mostraram que as melhores condições para o máximo P foram 150 cm.h-1 (velocidade de aplicação da amostra/carga), 6,0 cm de altura do leito fixo e 7,36 cm de altura do distribuidor. O extrato enzimático apresentou estabilidade entre 30-50ºC, pH 6-7 e apresentou máxima atividade em pH 5,5 e 55ºC. Os íons de Cu2+, Fe2+ e Zn2+ foram inibitórios para a quitosanase. Em contraste, o extrato enzimático foi significativamente ativado por Mn2+. Em condições optimizadas, a enzima mostrou ligar-se a resina na mesma medida usando caldo clarificado e não clarificada (0,32 e 0,3 U/g adsorvente, respectivamente). A fração recuperada após a eluição exibiu 31% de rendimento com um aumento de 1,35 vezes a atividade específica em relação ao inicial. Se analisada apenas fração eluída com NaCl 0,3 M é possível encontrar um fator de purificação de 1,75. Os resultados demonstraram que é possível purificar múltiplas proteínas, a partir de um extrato bruto sem qualquer pré-tratamento, com um processo de purificação econômico e de um único passo.