INVESTIGAÇÃO IN VITRO DA ATIVIDADE ANTIFÚNGICA E ANTIBIOFILME DA FRAÇÃO Ag2 DO EXTRATO DE Agelas dispar SOBRE ESPÉCIES DE Candida.
Candidíase. Leveduras. Produtos naturais. Alcaloides. Microscopia Eletrônica de Varredura.
Os biofilmes microbianos apresentam um papel relevante nas enfermidades humanas, tendo em vista que constituem uma barreira estrutural que dificulta a terapêutica antimicrobiana. Para as leveduras do gênero Candida, os biofilmes caracterizam-se como um arranjo tridimensional complexo, constituídos por diferentes formas celulares incorporadas a uma matriz de substância polimérica extracelular. Nas últimas décadas se tornou crescente a busca por compostos naturais para o tratamento de infecções microbianas com o intuito de novas alternativas frente aos mecanismos de resistência aos antimicrobianos, incluindo aqueles induzidos por biofilmes. A esponja marinha, Agelas díspar (Família Agelasidae) vem sendo mencionada como uma fonte bioativa, considerando seus metabólitos secundários, os derivados alcaloides, que apresentam atividade farmacológica significativa. Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi determinar a atividade antifúngica e antibiofilme da fração Ag2 do extrato metanólico de A. dispar sobre as cepas de leveduras do gênero Candida. A atividade biológica foi testada em 13 estipes de espécies de Candida, avaliando a Concentração Inibitória Mínima (CIM) pela técnica de microdiluição em caldo e o perfil da substância pelo método da Concentração Fungicida Mínima (CFM). A quantificação da formação e atividade antibiofilme da fração do extrato foi realizada aplicando o cristal violeta e a biomassa produzida foi avaliada pela obtenção das densidades ópticas. A fração Ag2 do extrato apresentou atividade antifúngica para 13 cepas, demonstrando CIM90% = 0,625 mg/mL (38%), seguido de 2,5 mg/mL (7,7%), 1,25 mg/mL (23,1%), 0,3125 mg/mL (15,4 %), 0,1562 mg/mL (15,4 %). O composto analisado apresentou CFM90% de 5,0 mg/mL (23,1%), 2,5 mg/mL (30,7%), 1,25 mg/mL (23,1%), 0,625 mg/mL (7,7%), 0,3125 mg/mL (15,4 %) frente as Candida spp. Os resultados da formação do biofilme indicaram que todos as estirpes foram produtoras de biofilme. Sendo, 10 (77%) cepas fracas produtoras e 3 (23%) moderadas produtoras. Deste modo, as produtoras moderadas: C. krusei, C. glabrata e C. parapsilosis foram utilizadas no teste da atividade antibiofilme (em formação e maduro), resultando em inibição da viabilidade celular (IC50%) variando entre 49,6% a 57,6%, 70,5% a 76,3% (biofilme em formação) e 42,8% a 67,2%, 63,3% a 78,8% (biofilme consolidado) quando as referidas cepas foram pós-tratadas, respectivamente, com as concentrações de 1,25mg/mL e 2,5mg/mL. Por meio da Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), houve a confirmação da atividade antibiofilme, observando-se que as concentrações empregadas foram capazes de causar a diminuição quantitativa da comunidade microbiana, bem como uma alteração estrutural e destruição a nível celular nos biofilmes em formação e maduro. Concluiu-se que, a fração Ag2 do extrato metanólico de A. dispar apresentou boa atividade antifúngica e natureza do tipo fungicida, além de eficiente para diminuir a carga microbiana e proporcionar modificações na morfologia estrutural das leveduras envolvidas no biofilme, como observados no MEV. Tais constatações sugerem que, o mecanismo de ação da fração seja a nível de membrana plasmática e/ou parede celular, levando a crer que Ag2 possa ser uma promissora estratégia terapêutica antifúngica e antibiofilme frente a espécies de Candida.