Banca de QUALIFICAÇÃO: HOZANA BEATRIZ DANTAS BARBALHO

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : HOZANA BEATRIZ DANTAS BARBALHO
DATA : 03/06/2026
HORA: 15:00
LOCAL: Sala Carl Peter von Dietrich
TÍTULO:

Desenvolvimento de um teste molecular para diagnóstico da Síndrome de Silver-Russell

PALAVRAS-CHAVES:

Síndrome de Silver-Russell; Imprinting; Hipometilação; Diagnóstico Molecular; MS-MLPA; Bissulfito de sódio; qPCR; MS-HRM.

PÁGINAS: 63
RESUMO:

A Síndrome de Silver-Russell (SSR) é uma condição rara de restrição de crescimento pré e pós natal associada a alterações no imprinting genômico. Cerca de 50% dos casos são causados por hipometilação no lócus 11p15.5, na região de controle de imprinting 1 (ICR1), que regula a expressão dos genes H19 e IGF2. Atualmente, o diagnóstico molecular é realizado principalmente por meio da técnica de Multiplex Ligationdependent Probe Amplification sensível à metilação (MS-MLPA). Apesar de sua ampla utilização, a técnica apresenta limitações relevantes, como o alto custo e a cobertura limitada, pois depende dos sítios de ligação da enzima HhaI, que tem como alvo apenas sete citosinas específicas na ICR1. Diante disso, este estudo teve o objetivo de identificar citosinas diferencialmente metiladas na região 11p15.5, desenvolver uma ferramen- ta molecular mais acessível para detecção da hipometilação, baseada em PCR, e realizar divulgação científica na rede social Instagram. Foi realizada uma análise de metilação diferencial, utilizando três coortes públicas de metilação e controles provenientes do Methbank, para identificar e validar as citosinas diferencialmente metiladas (DMCs) nas regiões do H19, IGF2 e CTCF. A metilação diferencial foi avaliada por meio de modelos de regressão linear simples (pacote limma, R), empregando pontos de corte rigorosos de tamanho do efeito ≥0,1 e p≤4,3×10-5. Com base nessa análise, pares de primers foram desenhados seguindo os critérios de Wojdacz et al. (2008). O DNA genômico de participantes com suspeita clínica de SSR (n=4) e de controles (n=6) foi tratado com bissulfito de sódio e amplificado por qPCR com SYBR Green, seguida de análise de curva de melting. Os dados de fluorescência foram normalizados para escala de 0 a 100% e comparados entre grupos pelo teste de soma de postos de Wilcoxon, utilizando a área sob a curva (AUC) como métrica principal, e representados graficamente. A análise dos metilomas identificou citosinas diferencialmente metiladas potencialmente relevantes para detecção da hipometilação em 11p15.5, principalmente no gene IGF2. O ensaio desenvolvido contemplou um número superior de citosinas-alvo em comparação ao MS-MLPA (26 vs. 7). Os resultados demonstraram amplificação satisfatória para H19 e IGF2. Para H19, não houve diferença significativa entre os grupos SSR vs. Controle (W=8; p=0,713). Já o IGF2 apresentou maior capacidade de distinção entre amostras da síndrome e dos controles, com diferença estatisticamente significativa (W=1; p=0,037). As principais limitações incluem o uso do SYBR Green em substituição a dyes saturantes específicos para HRM, o tamanho amostral reduzido e a ausência de confirmação molecular dos casos suspeitos. Em paralelo, foi desenvolvido um projeto de divulgação científica voltado à síndrome por meio do Instagram, que demonstrou potencial na facilitação do acesso à informação sobre SSR por diferentes públicos (leigos e profissionais). Os resultados indicam que a abordagem desenvolvida tem potencial para detecção qualitativa de hipometilação no lócus 11p15.5, representando uma possível alternativa mais acessível para o diagnóstico molecular da SSR, sendo necessários estudos adicionais, com maior tamanho amostral, para validação dos achados.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1880243 - DANIEL CARLOS FERREIRA LANZA
Externo ao Programa - 2566638 - CARLOS EDUARDO MAIA GOMES - UFRNExterna ao Programa - 1714243 - DANIELLA REGINA ARANTES MARTINS SALHA - UFRN