Banca de QUALIFICAÇÃO: STEPHANIE CAROLINE BIVAR MATIAS

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : STEPHANIE CAROLINE BIVAR MATIAS
DATA : 19/07/2021
HORA: 14:00
LOCAL: Via Google Meet
TÍTULO:

AVALIAÇÃO DE ESTRATÉGIAS DE PRODUÇÃO EM CULTIVO DESCONTÍNUO DA PROTEÍNA QUIMÉRICA MULTI-ANTIGÊNICA TgAGS/BsT DE Toxoplasma gondii EM Escherichia coli

 

PALAVRAS-CHAVES:

Toxoplasmose, Escherichia coli recombinante, cultivo descontínuo, proteína quimérica.

PÁGINAS: 85
RESUMO:

A toxoplasmose, apesar dos avanços da ciência e tecnologia, ainda não possui uma vacina capaz de imunizar humanos e animais contra todos os tipos isolados de Toxoplasma gondii. Devido à grande diversidade de antígenos apresentados pelo T. gondii uma vacina e teste de diagnóstico, a utilização de proteínas quiméricas contendo múltiplos antígenos, torna-se bastante promissora. Nesse contexto, o presente trabalho tem como principal foco avaliar estratégias de cultivo descontínuo na produção da proteína quimérica multi-antigênica TgAGS/BsT de Toxoplasma gondii realizados em incubador rotativo. Para atingir o objetivo proposto foram realizados diversos cultivos, em duplicata, para observar o comportamento cinético da cepa XL-1 Blue de E. coli em cinco diferentes composições de meio (2xTY, TB suplementado com glicose, TB suplementado com glicerol, LB e M9) sem adição de indutor. Em seguida, E. coli foi cultivada nos dois meios de cultivo que proporcionaram maior crescimento celular na etapa anterior, avaliando-se a influência de diferentes tempos de início da indução (0,5, 1 e 6 h) com 1 mM de IPTG na produção da proteína de interesse, crescimento celular, pH e ácido acético. Os resultados mostraram que dentre as formulações avaliadas, os meios 2xTY e TB suplementado com glicerol apresentaram as maiores concentrações celulares máximas de 3,425 ± 0,05 g/L e 5,483 ± 0,05 g/L, respectivamente. Nos ensaios induzidos por IPTG, observou-se maior expressão da proteína TgAGS/BsT com início da indução em 6 h de cultivo, com concentração máxima de proteína de interesse de 1,815 ± 0,018 para o meio 2xTY e 2,492 ± 0,026 g/L para o meio e TB.  Constatou-se, ainda, que a indução por IPTG mais tardia proporcionou maior estabilidade do plasmídeo pET-TgAGS, permanecendo com valores acima de 90% ao final do cultivo. A expressão da proteína TgAGS/BsT foi confirmada por eletroforese, apresentando massa molecular de aproximadamente 18,6 kDa. Portanto, o presente trabalho identificou as melhores condições de meio de cultivo e tempo de indução para a produção da proteína TgAGS/BsT cultivos em incubador rotativo.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1346198 - EVERALDO SILVINO DOS SANTOS
Externo à Instituição - CARLOS EDUARDO DE ARAÚJO PADILHA - UFRN
Externa à Instituição - NATHALIA KELLY DE ARAUJO - UFRN