Banca de QUALIFICAÇÃO: ANA GLÓRIA BARBOSA BEZERRA DE SOUSA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : ANA GLÓRIA BARBOSA BEZERRA DE SOUSA
DATA : 09/02/2018
HORA: 09:00
LOCAL: Sala de Reuniões do CB
TÍTULO:

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE HEMOLÍTICA MEDIADA PELO SISTEMA COMPLEMENTO EM ERITRÓCITOS HUMANOS TRATADOS COM EXTRATOS PROTÉICOS DE Plasmodium falciparum E SUAS POSSÍVEIS IMPLICAÇÕES PARA A MALÁRIA GRAVE

PALAVRAS-CHAVES:

1. Plasmodium falciparum; malária; sistema complemento; imunopatogênese; hemólise.

PÁGINAS: 70
RESUMO:

A malária é uma infecção causada por protozoários apicomplexos do gênero Plasmodium, de alta prevalência e morbidade, sobretudo nas regiões tropicais e sub-tropicais do planeta. O Plasmodium falciparum, considerado o mais agressivo, provoca uma série de modificações na superfície celular das hemácias parasitadas, como a expressão de moléculas responsáveis pelo processo de citoaderência, formação de rosetas e sequestro de eritrócitos parasitados, gerando quadros clínicos graves e, por muitas vezes, letais de malária. Frente a isso, o sistema de defesa inato irá se utilizar de alguns mecanismos a fim de controlar o avanço da infecção, dos quais destaca-se o sistema complemento. Entretanto, a ativação exacerbada desta resposta pode favorecer certas complicações associadas à infecção por P. falciparum. Nesse sentido, este estudo avaliou o grau de hemólise mediada pelo complemento de eritrócitos humanos sensibilizados com extratos proteicos de P. falciparum, em diferentes concentrações, através de ensaios hemolíticos autólogos in vitro, no intuito de estabelecer relações entre esta atividade e suas implicações 

para a patogênese da malária severa. Os extratos proteícos foram produzidos a partir do cultivo de P. falciparum (cepa 3D7) gerando um extrato denominado extrato bruto de P. falciparum (EBPf. No ensaio hemolítico autólogo, foram utilizados hemácias e soro, fonte de complemento, do mesmo individuo para análise de sua ativação. Como controle negativo utilizou-se o tampão VBS+ e, como controle positivo, água destilada. O soro humano inativado foi também utilizado a fim de comprovar a ação do complemento sob a lise dos eritrócitos, além de ter sido avaliada a atividade hemolítica em eritrócitos com traço falciforme. Realizou-se o mesmo ensaio utilizando a enzima neuraminidase a fim de comparar o perfil das atividades hemolíticas observadas. Num tratamento de uma concentração mínima de 0,6 ug/mL de EBPf, ocorreu uma hemólise de cerca de 60% quando em presença do complemento, enquanto que na ausência deste o efeito foi consideravelmente reduzido, indicando a sua participação. Nas hemácias com traço falciforme, houve uma pequena redução da hemólise em relação às hemácias normais, demonstrando a influência que esta característica genética exerce sobre a interação parasito-hospedeiro.  Em comparação com o tratamento com a neuraminidase, os perfis de ação hemolítica foram próximos, indicando que o P. falciparum provavelmente possui proteases com ação semelhante a esta enzima, clivando proteases sialisadas na superfície da célula-alvo e valendo-se de vias alternativas de invasão sob determinadas condições. O gel de SDS-PAGE corado com nitrato de prata revelou um perfil de degração protéica equivalente entre os tratamentos dos eritrócitos com EBPf e neuraminidase, reforçando esta ideia. Foi realizado um ensaio de dose-resposta partindo da concentração de 0,06 ug/mL, no qual observou-se uma redução da atividade hemolítica apenas a partir da concentração de 0,03 ug/mL de EBPf, indicando que a alta parasitemia não é fator estritamente crucial para a ativação do complemento, tratando-se, provavelmente, de um fenômeno biológico potencializado por outros fatores envolvidos no processo infeccioso. Desta forma, concluiu-se que os eritrócitos sensibilizados com EBPf perdem a capacidade de controlar a lise mediada pelo complemento, sendo este um dos fatores responsáveis pela perda da homeostasia do indivíduo, contribuindo assim para um processo inflamatório exarcerbado, gerando quadros característicos de malária grave.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 2213126 - VALTER FERREIRA DE ANDRADE NETO
Externo ao Programa - 1375489 - ANA CLAUDIA GALVAO FREIRE GOUVEIA
Externo ao Programa - 1752367 - PAULO MARCOS DA MATTA GUEDES