AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTICOAGULANTE E BLOQUEADORA DE ELASTASE DE UM INIBIDOR DE TRIPSINA ISOLADO DE Caesalpinea pyramidalis Tul.
Catingueira; elastase neutrofílica humana; coagulação, inflamação.
As plantas estão sujeitas a uma diversidade de condições bióticas e abióticas desfavoráveis, sofrendo constantemente alguma adaptação evolutiva que pode favorecer sua reprodução e sobrevivência. A elaboração de estratégias de defesa sofisticadas contra pragas e patógenos, como a síntese de diversos compostos naturais bioativos destaca-se como parte desse arsenal biológico adaptativo. Um grupo de molécula bioativas fundamental nesse contexto são os inibidores de proteases, que comprometem a atividade de enzimas digestórias de herbívoros e patógenos, contribuindo para o equilíbrio das interações biológicas. Os inibidores de protease, também são moléculas importantes devido ao seu potencial heterólogo, podendo ter efeitos in vitro e in vivo em diversos modelos de patógenos, bem como apresentar aplicações terapêuticas em uma gama de distúrbios que comprometem a saúde humana. Neste trabalho um inibidor de serinoprotease (CpTI), foi isolado das sementes de Caesalpinia pyramidalis Tul por fracionamento do extrato bruto com sulfato de amônio na faixa de saturação de 30-60%, seguido de separação em cromatografia de afinidade em coluna de Tripsina-Sepharose 4B. O pico retido foi enriquecido em atividade inibitória para as proteases serínicas do tipo tripsina, quimotripsina e elastase. O teste de termoestabilidade mostrou que o CpTI foi capaz de manter sua funcionalidade até 80 ºC e as concentrações necessárias para inibir 50% da atividade das enzimas tripsina, elastase neutrofílica humana (ENH) e quimotripsina foram de 17, 21 e 156 µg/mL, respectivamente. Nos ensaios in vitro CpTI se mostrou capaz de prolongar o tempo de coagulação em mais de 80 segundos para a via intrínseca (TPPa) em uma concentração de 36,2 µg/mL. Também foi observado que CpTI não possui atividade citotóxica para hemácias em nenhuma das concentrações testadas (0,03; 0,125 e 0,5 mg/mL). Esses resultados demonstram o potencial de uso terapêutico imunomodulatório e anticoagulante do CpTI.