Banca de DEFESA: ELLYNES AMANCIO CORREIA NUNES

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : ELLYNES AMANCIO CORREIA NUNES
DATA : 30/07/2024
HORA: 09:00
LOCAL: Videoconferência
TÍTULO:

PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR PARCIAL DE UMA LECTINA DEPENDENTE DE MANGANÊS DA PEÇONHA DA SERPENTE Bothrops moojeni

PALAVRAS-CHAVES:

 

Atividade biológica. Peçonhas ofídicas. Bioprospecção.

PÁGINAS: 109
RESUMO:

Moléculas bioativas isoladas de animais peçonhentos constituem uma variedade de compostos com diversas atividades biológicas conhecidas que podem ser direcionadas ao tratamento de diferentes doenças. As peçonhas ofídicas são importantes representantes de fontes de moléculas bioativas e são constituídas em cerca de 90% por proteínas e peptídeos, os quais podem desempenhar ou não ação enzimática. Essas toxinas desempenham diferentes mecanismos bioquímicos e por isso são responsáveis pela caracterização de acidentes causados por serpente. No Brasil as principais causadoras de acidentes ofídicos são as serpentes do gênero Bothrops, família Viperidae, cujo envenenamento é caracterizado por atividades proteolítica, hemorrágica e coagulante. O conhecimento acerca das proteínas envolvidas no quadro clínico permite o estudo de atividades heterólogas relacionadas a essas toxinas. Nesse contexto, objetivou-se isolar, caracterizar e conhecer atividades biológicas de uma proteína com atividade de lectina da peçonha da serpente Bothrops moojeni. Foi, portanto, realizada uma revisão bibliográfica prévia abordando as lectinas isoladas e caracterizadas de peçonhas ofídicas e suas principais características e classificação. Somado a isto, a busca por uma proteína com atividade de lectina foi realizada por meio de Cromatografia de Exclusão Molecular (CEM) e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência em Fase Reversa (CLAE-FR), seguida de Gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e ensaios de hemaglutinação, inibição de atividade hemaglutinante, dependência de íons, pH e temperatura, bem como atividade hemolítica e atividade antimicrobiana frente a linhagens bacterianas de Acinetobacter baumannii e Staphylococcus aureus, e atividade antibiofilme. A exclusão molecular gerou um perfil cromatográfico com 6 picos que foram aplicados a géis de poliacrilamida e a ensaio de hemaglutinação. A atividade hemaglutinante foi observada nas frações 5 e 6, com o melhor resultado observado na fração 5, que recebeu o nome de BmoojL. Foi observado também que BmoojL se mostrou manganês dependente, diferente da maioria das lectinas isoladas de serpente que são cálcio dependentes. Além disto, BmoojL foi inibida na presença dos carboidratos glicose, frutose, manose, fucose e N-acetilgalactosamina, e se mostrou ativa em temperaturas de até 80 ºC, e em faixas de pH de 5 a 9. O ensaio hemolítico mostrou que a molécula não promove hemaglutinação nas concentrações testadas (0,5 a 0,0625 mg. mL^-1), mostrando que a molécula poderia ser aplicada a alguns testes biológicos. Portanto, os ensaios antimicrobianos mostraram que apesar de não ter atingido CIM, BmoojL reduziu o crescimento bacteriano da linhagem Gram-negativa. O ensaio antibiofilme mostrou que para S. aureus, BmoojL foi efetivo, reduzindo consideravelmente o crescimento do biofilme em todas as concentrações testadas em cerca de 50%. Mostramos ainda que o íon de forma isolada e associado a outra proteína não desempenhou atividade significativa, como observado com BmoojL. Desta forma, conseguimos isolar uma molécula com atividade lectinica, embora mais testes sejam necessários para sua total caracterização, já destacamos seu potencial em desempenhar uma atividade antimicrobiana e antibiofilme, contribuindo assim para as pesquisas envolvendo moléculas bioativas isoladas de serpentes peçonhentas.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - ***.121.724-** - LUDOVICO MIGLIOLO - UCDB
Interna - 2578619 - ANA HELONEIDA DE ARAUJO MORAIS
Interno - 1544647 - MATHEUS DE FREITAS FERNANDES PEDROSA
Externa à Instituição - JULIANA PAVAN ZULIANI - UNIR
Externo à Instituição - OCTÁVIO LUIZ FRANCO - UCDB