EFEITO DO INIBIDOR DE TRIPSINA ISOLADO DE SEMENTES DE TAMARINDO ENCAPSULADO SOBRE PARÂMETROS BIOQUÍMICOS EM RATOS WISTAR SUPERALIMENTADOS
Inibidor de Tripsina; Encapsulamento; Superalimentação, Estabilidade; Digestibilidade; Glicemia de jejum, Perfil lipídico.
Muitos estudos apresentam os benefícios dos inibidores de proteases, especialmente do Inibidor de Tripsina Isolado das sementes de tamarindo (Tamarindus indica L.) (ITT), o qual atua melhorando diversos parâmetros bioquímicos em ratos Wistar. Dessa forma, buscam-se alternativas para intensificar o efeito do ITT, sendo uma opção o encapsulamento, que permite uma liberação controlada e potencialização do efeito do material encapsulado. Portanto, este estudo objetivou avaliar o ITT encapsulado (EQPI) quanto à atividade antitríptica em pH ácido, e também in vitro frente às condições fisiológicas do trato gastrointestinal, além de determinar o efeito sobre parâmetros bioquímicos (glicemia, insulina e perfil lipídico) em ratos Wistar superalimentados. O ITT foi obtido por meio do fracionamento proteico, utilizando sulfato de amônio, seguido por Cromatografia de Afinidade em Tripsina-Sepharose. Para o encapsulamento por nanoprecipitação, foi preparada uma solução aquosa contendo ITT, proteína isolada do soro leite, quitosana purificada (1:2:2 p/p/p) e Tween 80. O etanol absoluto foi utilizado para promover a precipitação das partículas sob a ação de um ultradispersor. O EQPI foi desidratado em etanol, filtrado, liofilizado e caracterizado por diversos métodos físicos e químicos. Posteriormente, as partículas foram avaliadas in vitro quanto à atividade antitríptica em pH ácido, utilizando diversas etapas de ultrafiltração em Amicon® 100 K. Ainda, foi avaliada a estabilidade frente às condições do trato gastrointestinal in vitro sendo realizada nas três fases: oral, gástrica e intestinal e, monitorada por meio da atividade antitríptica, do perfil proteico em gel de SDS-PAGE e por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Além disso, o EQPI foi avaliado in vivo por meio de gavagem oral (12.5 mg/kg) em ratos Wistar superalimentados com dieta de alto índice glicêmico e alta carga glicêmica (Dieta HGLI). Os resultados obtidos mostraram que, em pH ácido o EQPI interage quimicamente com os agentes encapsulantes em todas as etapas avaliadas, mostrando uma maior preservação da atividade antitríptica nas partículas retidas na membrana [68.10% (0.70)] em relação ao ITT isolado [8.30% (2.60)]. O EQPI não foi susceptível às enzimas gástricas, mantendo sua atividade antitríptica em 100%, enquanto que o ITT isolado foi parcialmente hidrolisado, perdendo completamente a atividade antitripsina e pico proteico característico do ITT observado por CLAE. Frente às enzimas intestinais, EQPI e ITT foram passíveis de hidrólise, como confirmado por CLAE. O EQPI administrado em ratos Wistar superalimentados com dieta HGLI, reduziu de forma significativa a glicemia e, aumentou o colesterol HDL (p<0,05). A técnica de encapsulação promoveu maior proteção ao ITT e, melhora efetiva dos parâmetros bioquímicos relacionados ao desencadeamento de doenças crônicas não-transmissíveis, utilizando uma concentração de inibidor dez vezes menor que a administrada em estudos in vivo com o ITT isolado.