Banca de QUALIFICAÇÃO: JOANA CRISTINA MEDEIROS TAVARES

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: JOANA CRISTINA MEDEIROS TAVARES
DATA: 21/02/2013
HORA: 14:00
LOCAL: Sala de Reuniões do CB
TÍTULO:

Transcriptoma diferencial de células-tronco mesenquimais humanas em passagens iniciais e tardias


PALAVRAS-CHAVES:

A DEFINIR


PÁGINAS: 227
GRANDE ÁREA: Ciências da Saúde
ÁREA: Medicina
RESUMO:

Células-tronco mesenquimais humanas (CTMH) são poderosas fontes de terapia celular na medicina regenerativa. Elas podem ser obtidas a partir de diferentes tecidos. O cordão umbilical é uma fonte de CTMH que não gera conflitos éticos, pois é descartado após o nascimento. O longo período de cultivo pode resultar em senescência replicativa ou estar relacionado com o aparecimento de alterações cromossômicas responsáveis pela aquisição de um caráter tumorigênico in vitro. Ambos os fenômenos podem afetar importantes processos celulares como aqueles relacionados à so brevivência e manutenção do fenótipo de célula-tronco. Neste estudo, pela primeira vez, o perfil de expressão de CTMH com uma inversão cromossômica paracêntrica (CTMH/inv) foi comparado ao de CTMH que possuem cariótipo normal (CTMH/n) em passagens precoces e tardias de cultivo in vitro. Além disso, comparamos o transcriptoma de cada grupo de CTMH em passagens iniciais com passagens tardias. CTMH utilizadas neste estudo foram isoladas da veia do cordão umbilical de três dadores, dois CTMH/n e de um CTMH/inv. Após a  sua criopreservação, elas foram expandidas in vitro até alcançarem a senescência. O RNA total foi extraído utilizando o RNeasy mini kit (Qiagen) e  marcado com o ® 3 'GeneChip IVT expresso Kit (Affymetrix, Inc.). Subsequentemente, o aRNA fragmentado foi hibridado no chip Affymetrix Human Genome U133 Plus 2.0 (Affymetrix matrizes Inc.). A análise estatística da expressão diferencial foi realizada usando o Partek Suite Software Genomic, versão 6.4 (Partek Inc.). Foram consideradas estatisticamente significativas as  diferenças na expressão com p-valor com correção de Bonferroni ˂0.01. Apenas os sinais com fold change ˃3.0 foram incluídos na lista de diferencialmente expressos. Diferenças na expressão gênica observadas no estudo dos microarrays foram confirmadas por resultados de RT-PCR em tempo real. Para a interpretação biológica dos dados foram utilizados: IPA (Ingenuity Systems) para análise de enriquecimento de funções; STRING 9,0 (http://string-db.org) para a construção de redes de interações; Cytoscape 2,8 (http://cytoscape.org) para a visualização das redes e análises de gargalos  (bottlenecks) com o auxílio do software GraphPad Prism 5.0. O pluggin BiNGO do Cytoscape foi utilizado para avaliar a representação de categorias funcionais no Gene Ontology nas redes biológicas. Os resultados mostraram que há diferença nos perfis de expressão entre as CTMH/inv e CTMH/n, sendo maior a diferença quando as células estão senescentes. A comparação entre senescentes e jovens em cada grupo de CTMH também mostrou que há uma diferença maior nas senescentes no grupo CTMH/inv. Novas redes foram identificadas para genes relacionados com a resposta ao longo do tempo de cultivo nos dois grupos de CTMH. Também foram identificados genes que podem coordenar funções importantes mais enriquecidas na redes, como por exemplo, CXCL12, SFRP1, EGF, SPP1, MMP1 e THBS1. A interpretação biológica destes dados sugere que a população de células CTMH/inv têm diferentes características constitucionais, relacionadas com o seu potencial de proliferação, diferenciação e resposta a estímulos, responsáveis por um processo de senescência replicativa em CTMH/inv distinto das CTMH/n. Os genes identificados neste estudo são candidatos a marcadores da senescência celular em CTMH, mas a sua relevância funcional neste processo deve ser testado em experiências adicionais in vitro e/ou in vivo.


MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1939184 - SANDRO JOSE DE SOUZA
Externo ao Programa - 1880243 - DANIEL CARLOS FERREIRA LANZA
Externo à Instituição - ANDRÉ DUCATI LUCHESSI - UFRN
Notícia cadastrada em: 18/02/2013 09:03
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