CONSERVAÇÃO DE MATERIAL GENÉTICO DE ESPÉCIES SILVESTRES DO BIOMA CAATINGA POR MEIO DE MANIPULAÇÃO DE OÓCITOS INCLUSOS EM FOLÍCULOS OVARIANOS PRÉ ANTRAIS (MOIFOPA)
Folículos pré antrais, cultivo in vitro, FSH, α MEM+, TCM199, proliferação celular.
O bioma Caatinga brasileiro é um dos mais ricos em flora e fauna no mundo, entretanto também é um dos mais alterados pela ação humana. Essa grande alteração interfere na população de várias espécies, entre elas os catetos (Pecari tajacu), as cutias (Dasyprocta azarae) e os preás (Galea spixii spixii), as quais têm sido caçadas pela população local para serem utilizadas como uma fonte alternativa de proteína animal. Visando tanto a preservação das espécies como o aumento do potencial reprodutivo em cativeiro, vem sendo desenvolvida a biotécnica de manipulação de oócitos inclusos em folículos pré antrais (MOIFOPA), a qual tem por objetivo o resgate e a manipulação in vitro de folículos pré-antrais visando sua conservação, através da criopreservação, o seu crescimento e maturação. O experimento foi dividido em quatro etapas, sendo que o objetivo da primeira delas foi avaliar o efeito do α MEM+ ou TCM199 associados ou não a 50ng de FSHr sobre a morfologia, a ativaçãoe crescimento de folículos ovarianos pré antrais de catetos, cultivados in vitro durante 1 ou 7 dias, bem como avaliar o seu efeito sobre a matriz extracelular. Para tanto pares de ovários (n=5) foram coletados e divididos em fragmentos, os quais foram destinados ao grupo controle (não cultivado) ou aos tratamentos. A morfologia, crescimento e ativação dos folículos pré antrais (FOPA) foram avaliadas através de histologia clássica. A imunomarcação para Ag-NOR e PCNA foi utilizada no intuito de se avaliar a proliferação celular e a técnica de coloração com picrosirius red foi utilizada para a avaliação da matriz extracelular (MEC). Após 7 dias de cultivo (CIV) apenas o TCM199/FSH manteve a proporção de FOPA intactos similar ao dia 1 (63,2%), contudo nenhuma diferença foi observada entre os tratamentos (P>0.05). Adicionalmente, um aumento na proporção de FOPA em desenvolvimento foi verificada após 7 dias de CIV, sendo um indicativo de ativação folicular (P>0.05). Através da análise com Ag-NOR, observou-se que apenas o tratamento com TCM199/FSH manteve a proporção de proliferação celular similar ao dia 1 (P>0.05). A coloração com picrosirius red revelou que a MEC permaneceu intacta em odos os tratamento após 7 dias de CIV (P>0.05). Dessa forma, é sugerido que o CIV de FOPA de catetos seja realizado através do uso de TCM1099/FSH, por até 7 dias, nas condições de CIV descritas. As demais etapas do experimento tiveram como objetivos descrever as características histológicas e ultraestruturais da população de FOPA de cutias; descrição das características histológicas e ultraestruturais e do método de vitrificação em superfície sólida para conservação da população de FOPA de preás; e avaliação da vitrificação em superfície sólida utilizando vários crioprotetores sobre a morfologia e viabilidade de FOPA de catetos.