Banca de QUALIFICAÇÃO: MARIA FERNANDA BEZERRA DE SOUZA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : MARIA FERNANDA BEZERRA DE SOUZA
DATA : 28/05/2021
HORA: 14:00
LOCAL: Videoconferência - Link para acesso: https://meet.google.com/yox-idcu-eif
TÍTULO:

DESENVOLVIMENTO DE MARCADORES MOLECULARES PARA IDENTIFICAÇÃO DE Plasmodium sp.

PALAVRAS-CHAVES:

Apicomplexa-Plasmodium-PCR-18S-MSP1

PÁGINAS: 85
RESUMO:

Inicialmente, o gênero Plasmodium compreendia apenas 4 espécies relacionadas a malária humana: P. vivax, P. falciparum, P. malariae e P. ovale. Com o avanço das ferramentas moleculares e da bioinformática observou-se um aumento no número de espécies que provocam essa doença em humanos como o P. knowlessi, P. cynolmolgi e P. simiun. A reação em cadeia da polimerase (PCR) tem sido considerada a mais eficaz dentre as técnicas de detecção. A maior parte dos protocolos de PCR já descritos para identificação das espécies Plasmodium sp tem como alvo o gene da subunidade 18S do RNA ribossomal. Entretanto os primers para identificação de P. vivax, P. falciparum, P. malariae e P. ovale geralmente apresentam reações cruzadas com as demais espécies, incluindo espécies que também podem ocasionar a malária em humanos. O padrão da evolução do gene 18S no grupo apicomplexa é marcado pelas cópias que se assemelham entre espécies, por gênero (Plasmodium) e no grupo apicomplexa. Apesar da grande eficiência dos Primers para 18S rDNA, esse alvo não é suficiente para diferenciação das espécies de Plasmodium. Dessa forma foi desenvolvido um sistema complementar, baseado em outro marcador molecular, para identificação das espécies de Plasmodium. Foram selecionadas sequências disponíveis para seis espécies que causam malária em humanos (Plasmodium vivax, Plasmodium falciparum, Plasmodium malariae, Plasmodium ovale, Plasmodium knowlessi e Plasmodium cynomolgi). Nessa abordagem, foram investigadas as sequencias diversos genes. A validação do marcador molecular para Plasmodium se deu com base na especificidade e no número de sequências disponíveis para todas as espécies. Dentre eles, o gene escolhido para desenho dos primers foi o MSP1 (merozoite surface protein). O sistema para identificação de Plasmodium foi construído de forma a produzir amplicons de tamanho diferente para cada espécie, possibilitando a identificação da espécie sem a necessidade de sequenciamento do amplicom. Então em decorrência da particularidade do 18S um nested-PCR já proposto para detecção dos apicomplexas foi validado para uma triagem inicial. E um sistema de nested-PCR foi elaborado para P. vivax e P. falciparum que foram testadas in vitro.  Foi possível verificar que os sistemas para as duas espécies mais recorrentes no Brasil, apresentam sensibilidade e especificidade. Por meio da verificação da amplificação tanto de amostras extraídas de cultura de células quando DNAs de pacientes. A especificidade dentro do gênero Plasmodium também foi confirmada. Por meio da verificação da não amplificação a partir de amostras de Plasmodium berghei e também foi observado que não existe amplificação cruzada entre amostras de P. vivax e P. falciparum. 

MEMBROS DA BANCA:
Interno - 1046922 - LEONARDO CAPISTRANO FERREIRA
Externa à Instituição - PATRICIA DE ABREU MOREIRA - UFOP
Presidente - 2213126 - VALTER FERREIRA DE ANDRADE NETO