Banca de DEFESA: JOHNY WYSLLAS DE FREITAS OLIVEIRA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : JOHNY WYSLLAS DE FREITAS OLIVEIRA
DATA : 30/08/2019
HORA: 09:00
LOCAL: Sala do POP - Centro de Convivência
TÍTULO:

CARACTERIZAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIPARASITÁRIA DO DIETILDITIOCARBAMATO FRENTE A DIFERENTES CEPAS DE Trypanosoma cruzi

PALAVRAS-CHAVES:

Doença de Chagas, Trypanosoma cruzi, DETC, Atividade antiparasitária, DTU’s.

PÁGINAS: 134
RESUMO:

A Doença de Chagas causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi acometendo milhões de pessoas. Os fármacos tradicionalmente utilizados além de serem altamente citotóxicos não são eficazes na fase crônica da doença. Além disso, o parasita apresenta uma diversidade genética que ocasionam diferentes manifestações clínicas e resistência aos tratamentos. O dietilditiocarbamato de sódio pertencente a classe dos ditiocarbamatos que são compostos químicos de alta versatilidade que permite interagir com metais e causar o aumento de radicais livres oxidativo. O objetivo é caracterizar o dano causado por este composto sobre diferentes cepas do T. cruzi.. As diferentes cepas foram cultivados em meio LIT.Os ensaios antiparasitários foram realizados em períodos de 24h e 48h avaliando do DETC. Para este ensaio foram utilizadas epimastigota e tripomastigota do T. crzi e avaliados através do ensaio de redução da resazurina e contagem em câmera clara. Analisou-se os mecanismos de morte parasitária desencadeados do composto frente epimastigota do T. cruzi no período de 24 horas. Os danos mitocondriais causados pelo DETC sob o T. cruzi epimastigota após 24 hrs de tratamento através do ensaio de potencial de membrana. Foi analisado também as alterações morfológicas através da microscopia eletrônica de varredura da ação do DETC após 24 horas de tratamento. A citotoxicidade celular do DETC também foi analisada frente as linhagens animais 3T3 e RAW após 24 horas após aplicação do composto e avaliado atrvés do ensaio de redução do MTT. Ademais, buscou-se analisar a ação inibitória do DETC sob proteínas proteolíticas dos extratos do T. cruzi através da zimográfia sendo analisado através da densitometria. Tendo em mente que os ditiocarbamatos apresentam uma importante ação inibitória sob a α-anydrase carbônica do T. cruzi buscou-se evidenciar o ancoramento do DETC nesta proteína através de ensaios in silico de docking molecular. A partir dos ensaios antiparasitários foi observado uma elevada atividade antiparasitária sob as diferentes cepas e determinou-se a concentração necessária para eliminar 50% dos parasitas (IC₅₀) de cada uma delas resultando de 0,288 µM até 0,664 µM para epimastigota e de 0,235 µM até 0,790 µM para tripomastigota de acordo com a cepa. Pela analise da citotoxicidade celular DETC demonstrou citotoxicidade moderada contra as linhagens animais. Ao analisar os mecanismos de morte celular notou-se a inespecificade do marcador para determinar os processos de morte celular pelo ancoramento da anexina ou do PI, evidenciando a não expressão de fosfatidilserina. Através do ensaio para avaliar os danos mitocondriais causados notou-se uma forte ação do DETC nas diferentes cepas inibindo o potencial de membrana mitocondrial, chegando a atingir 80% de redução. Através das analises da microscopia eletrônica de varredura observou-se a descontinuidade na membrana celular do parasita, além de rompimento e formação de poros. Pela zimografia foi constatado uma redução no potencial da atividade proteolítica dos extratos dos parasitas que chegaram a alcançar 36%. Por fim, constatou-se que o DETC apresentar uma alta capacidade de interagir para inibir a α- Anidrase carbônica, analisando o posicionamento do seu ancoramento na estrutura proteíca. Portanto o DETC apresenta-se como excelente candidato para tratamento alternativo a Doença de Chagas devido a elevada atividade antiparasitária, não apresenta uma citotoxicidade elevada e desencadeia ações sobre compartimentos específicos do parasita, além disso identificou-se a α-Anidrase carbônico como possível alvo para o DETC.

MEMBROS DA BANCA:
Externa à Instituição - ALINE RIMOLDI RIBEIRO - Bordeaux
Externo ao Programa - 1715109 - DANIEL DE LIMA PONTES
Interno - 2195251 - HUGO ALEXANDRE DE OLIVEIRA ROCHA
Presidente - 2275890 - MARCELO DE SOUSA DA SILVA