Banca de QUALIFICAÇÃO: JOHNY WYSLLAS DE FREITAS OLIVEIRA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : JOHNY WYSLLAS DE FREITAS OLIVEIRA
DATA : 05/08/2019
HORA: 14:00
LOCAL: Sala Carl Peter von Dietrich - Departamento de Bioquímica
TÍTULO:

Caracterização da atividade antiparasitária do Dietilditiocarbamato de sódio trihidratado frente a diferentes cepas de Trypanosoma cruzi

PALAVRAS-CHAVES:

DETC, Trypanosoma cruzi, Atividade antiparasitária, testes in silico, alvos proteicos, ação proteolítica.

PÁGINAS: 107
RESUMO:

A Doença de Chagas é uma zoonose causada pelo protozoário monoflagelado Trypanosoma cruzi que acomete milhares de pessoas ao redor do mundo. Para o controle terapêutica da Doença de Chagas, os fármacos convencionais além de serem altamente citotóxicos não apresentam respostas satisfatórias para a fase crônica da doença. T. cruzi tem um ciclo biológico do tipo heteroxênico entre o vetor invertebrado Triatomineo e um hospedeiro mamífero. Durante a infecção o parasita apresenta uma maquinaria de resposta ao dano oxidativo desencadeado pelo sistema hospedeiro uma delas conferindo a capacidade de resistência às espécies reativas de oxigênio e nitrogênio. Os ditiocarbamatos por sua vez são um grupo de compostos químicos de alta versatilidade, devido à sua estrutura química formado por uma amina e um dissulfeto de carbono, peritindo a capacidade de interação com metais e burst oxidativo. O DETC em estudos anteriores demonstrou atividade antiparasitária contra Leishmania sp. Portanto, neste trabalho buscou-se avaliar a atividade antiparasitária do DETC frente a diferentes cepas do T. cruzi em diferentes formas evolutivas. Adicionalmente, buscou-se caracterizar seu mecanismo de ação antiparasitária e elucidar possíveis alvos moleculares. Para tal foi realizado ensaios antiparasitários em períodos de 24h e 48h avaliando diferentes concentrações de DETC variando de 0,044 µM até 4,44 µM para as formas epimastigota e tripomastigota, através dos ensaios de resazurina, contagem em câmera clara na qual foi observado uma elevada atividade antiparasitária e determinou-se a dose necessária para eliminar 50% dos parasitas (Ic₅₀) resultando em torno de 0,444 µM. Além do mais, analisou-se os mecanismos de morte celular através do ensaio desencadeados pelo DETC nas concentrações de (4,44 µM, 0,444 µM, 0,044 µM) frente a forma epimastigota do T.cruzi no período de 24 horas utilizando o kit Annexina V-FITC, na qual foi observado baixíssima atividade para as cepas Qmm9 e Cl Brener e nenhuma resposta para as cepas Dm28c e Y. Também foi analisado os danos mitocondriais causados pelo DETC nas concentrações de (0,444 µM; 1,11 µM; 2,22 µM) sob o T. cruzi no período de 24 hrs através do ensaio da rodamina123 onde notou-se uma forte ação do DETC nas diferentes cepas inibindo o potencial de membrana mitocondrial. Além disso, foi analisado as alterações estruturais através da microscopia eletrônica de varredura apontando alterações de membrana, rompimento e formação de poros formados quando aplicado as doses referentes ao Ic₅₀. Ademais, buscou-se analisar a ação do DETC em concentrações que variaram de 0,625 mM até 10 mM sobre proteínas proteolíticas através da zimográfia, sendo analisado em gel sob os extratos dos parasitas sendo constatado uma redução no potencial da atividade proteolítica dos extratos dos parasitas que chegaram a alcançar 40%. Por fim a identificação de possíveis alvos moleculares através de ensaios in silico de docking molecular utilizando o software Auto-dock Vina, constatou-se que o DETC pode apresentar uma alta capacidade de interagir para inibir a α- Anydrase carbônica, analisando o posicionamento de ancoramento. Portanto o DETC apresenta-se como excelente candidato para tratamento alternativo a Doença de Chagas devido a elevada atividade antiparasitária, não apresenta uma citotoxicidade elevada e desencadeia ações sobre compartimentos específicos do parasita, além disso identificou-se a α-Anidrase carbônico como possível alvo para o DETC.

MEMBROS DA BANCA:
Externo ao Programa - 1715109 - DANIEL DE LIMA PONTES
Externo ao Programa - 1893445 - EUZEBIO GUIMARAES BARBOSA
Presidente - 2213126 - VALTER FERREIRA DE ANDRADE NETO