Moléculas naturais com ação bioativa, tais como, o inibidor de tripsina isolado de sementes de tamarindo (Tamarindus indica L.) (ITT) destacam-se entre os agentes sacietogênicos e anti-inflamatórios estudados na atualidade. Nessa perspectiva, o encapsulamento do ITT em quitosana purificada e proteína isolada dosoro leite (EQPI) pode ser uma estratégia para prolongar o efeito desse inibidor, de forma a modular ou potencializar os efeitos bioativos. Entretanto para isso, precisa ser avaliada a segurança, visando possíveis aplicações clínicas. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar a citoxicidade e toxicidade sanguínea subaguda da dose bioativa do EQPI em ratos Wistar alimentados com dieta de alto índice glicêmico. Para isso, o ITT foi obtido a partir do fracionamento proteico utilizando sulfato de amônio. A fração com maior atividade inibitória contra tripsina, fracionamento de 30-60%, foi isolada por Cromatografia de Afinidade em Tripsina-Sepharose, e utilizada para síntese de nanopartículas. O EQPI foi produzido pelo método de nanoprecipitação em solvente orgânico, respeitando a proporção de ITT, quitosana purificada e proteína isolada do soro do leite de 1:2:2 p/p/p, respectivamente. O encapsulado obtido foi caracterizado por diferentes análises físicas e químicas, bem como avaliado quanto à interação entre o ITT e os agentes encapsulantes em água, por meio diversas etapas de ultrafiltração em Amicon® 100 K, sendo monitorado pela atividade antitríptica. Adicionalmente, foram avaliadas a citotoxicidade do EQPI em diferentes concentrações (0,5, 2,5 e 5 mg/mL) por meio do ensaio de Brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil tetrazolium (MTT) e resazurina, utilizando duas linhagens celulares, (Caco-2 e CCD-18Co;) e também a toxicidade sanguínea (hemograma, função hepática e renal) em ratos Wistar macho (n = 10), alimentados com dieta de alto índice glicêmico e administrado com EQPI (12,5 mg/Kg) por dias 10 dias. O EQPI apresentou partículas esféricas com superfície lisa de acordo com a Microscopia Eletrônica de Varredura, diâmetro média de 118 nm (17.27), índice de polidispersão de 0.373 (0.02) e, carga superficial de -38,26 mV (0,15). Quanto à interação do ITT e EQPI em água por meio da avaliação da atividade antitríptica, observou-se que o ITT retido em Amicon® 100 K não apresentouatividade antitríptica (0,8%) quando comparado às alíquotas obtidas após as três etapas de ultrafiltração (p<0,05). Para o EQPI, os resultados sugeriram que o mesmo não atravessou a membrana quando ultrafiltrado, pois a atividade antitríptica não foi observada nos filtrados (0%), ao contrário das alíquotas sem filtrar e retida em Amicon® (p>0,05), que apresentaram 100% de atividade. O ensaio de citotoxicidade apontou alta viabilidade celular (>70%) para Caco-2 e CCD-18Co, quando exposta ao EQPI avaliado em diferentes concentrações. Quanto à toxicidade sanguínea subaguda do EQPI administrado em ratos Wistar, também não foram demostrados efeitos tóxicos de acordo com os resultados obtidos para os parâmetros bioquímicos avaliados. Nesteestudo, o EQPI se mostrou eficiente em proteger o ITT quando disperso em água e, as concentrações do mesmo avaliadas em células e no modelo experimental, não demostraram sinais de toxicidade, sugerindo uma aplicação segura dessas partículas. Por fim, assegurando a sua aplicação em estudos complementares para investigar à eficácia no tratamento da obesidade e suas complicações.