LAMP de região multicópia para o rápido diagnóstico da histoplasmose
LAMP, histoplasmose, diagnóstico, amplificação isotérmica
A histoplasmose é uma doença mundialmente distribuída e que afeta principalmente pacientes com deficiência do sistema imunológico. No Brasil, a taxa de mortalidade da histoplasmose pode chegar à 72%, devido, principalmente, às dificuldades de diagnóstico da doença, dentre os quais, o cultivo é o diagnóstico de escolha, podendo levar até 8 semanas para obtenção de um resultado conclusivo. Os exames histopatológicos, por outro lado, são incapazes de identificar o patógeno observado na amostra, apesar de ser um indicativo de infecção. Os imunoensaios tem sua sensibilidade influenciada pelo estado imunológico do paciente e forma clínica da doença, além de apresentarem, frequentemente, reação cruzada com outros fungos e bactérias. Os métodos moleculares, por sua vez, não são acessíveis para muitos laboratórios e exigem mão de obra especializada. Visto isso, esse projeto teve como objetivo desenvolver um ensaio de LAMP (Loop-mediated Isothermal Amplification) para detecção de Histoplasma capsulatum em amostras clínicas. Devido ao caráter isotermal, esta reação dispensa o uso de termocicladores, além de possibilitar revelar o resultado de forma alternativa ao gel de agarose. O LAMP foi desenvolvido para detectar a região ITS do genoma do patógeno, adquirindo boa sensibilidade (limite de detecção de 1 fg/µl), sendo capaz de detectar todas as variantes genéticas testadas e permitindo o diagnóstico diretamente em amostra de sangue enriquecida com leveduras, sem a necessidade de extração de DNA.