Banca de DEFESA: NATHALIA MAÍRA CABRAL DE MEDEIROS

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : NATHALIA MAÍRA CABRAL DE MEDEIROS
DATA : 15/08/2018
HORA: 14:00
LOCAL: Sala Carl Peter von Dietrich - Departamento de Bioquímica
TÍTULO:

IDENTIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE COMPONENTES DA VIA DE EXCISÃO DE BASES (BER) EM CANA-DE-AÇÚCAR (SACCHARUM spp.).

PALAVRAS-CHAVES:

Reparo de DNA, AP Endonuclease, cana-de-açúcar, caracterização bioquímica, Filogenia, Modelagem

PÁGINAS: 326
RESUMO:

A produtividade de qualquer cultivar está diretamente relacionada com a estabilidade de seu genoma. Desta forma se este sofre algum dano ou alteração em sua sequência pode acarretar consequências que podem afetar diretamente o seu desenvolvimento/crescimento. A resposta ao dano ao DNA ocorre por meio de seu reparo que transcorre por meio de diferentes vias, sendo uma delas a via de excisão de bases (BER), cujos estudos em diferentes plantas ainda são poucos. Um dos obstáculos no avanço da pesquisa seria a complexidade do genoma vegetal presente em alguns cultivares de importância agroeconômica - a exemplo da cana-de-açúcar- de modo que muitos ensaios e estudos utilizam organismos modelos diploides. Este trabalho propõe preencher uma lacuna existente no conhecimento da via BER em plantas, em especial para a cana-de-açúcar. Numa primeira abordagem do trabalho, se utilizou de uma sequência homóloga a AP endonuclease de Arabidosis thaliana (AtARP) denominada de ScARP1. Esta foi alvo de um ensaio de caracterização enzimática. A segunda abordagem utilizada foi de identificar outros componentes da via BER em cana-de-açúcar e comparar os resultados obtidos com as sequências de outros organismos vegetais para o aprofundamento na questão da conservação desta via, retendo um foco especial na família Poaceae. Para a primeira abordagem, a proteína ScARP1 foi primeiramente clonada, expressa e purificada. Com esta foram realizados diferentes ensaios que visaram avaliar a sua eficiência enzimática (considerando temperatura, cofatores enzimáticos e concentração de sais), assim como os substratos que seriam reconhecidos por esta enzima. Foi observado que a proteína ScARP1 possui apenas atividade AP endonuclease, uma vez que não reconheceu outros substratos com lesões. Além disso, também foi examinado a possível existência da complementação enzimática de ScARP1 em extratos proteicos do mutante arp^-/- de A. thalina. Foi observado uma complementação parcial. Para a segunda abordagem deste trabalho, foi considerando os resultados anteriores, onde foi verificado uma duplicação em cana-de-açúcar para a sequência AP endonuclease (ScARP1 e ScARP3), além de trabalho recente de revisão da via BER em plantas. Com base nestes trabalhos foi efetuada uma busca nos bancos de dados de sequências ESTs para cana-de-açúcar (SUCEST-FUN) por sequências pertencentes a via BER. Os resultados dessa busca e dados oriundos da analises filogenéticas (via TaxOnTree) e inferências Bayesianas (via BEAST v2.4.8) foram feitas com o intuito de verificar a ocorrência de duplicações dos componentes de BER. As sequências encontradas foram caracterizadas quanto a presença de domínios conservados, além de algumas delas foram modeladas, criando modelos hipotéticos. Algumas das putativas proteínas de cana-de-açúcar identificadas diferem na sua estrutura com as proteínas de referência da A. thalina, além de duplicações foram observadas em algumas famílias vegetais em detrimento de outras, indicando possíveis diferenças do modo de ação da via BER. Os resultados obtidos com estre trabalho forneceram novas informações referente caracterização bem como a caracterização enzimática dos componentes da via BER, ampliando o conhecimento sobre essa via em organismos vegetais.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1453487 - KATIA CASTANHO SCORTECCI
Externo ao Programa - 1813882 - ALICE DE MORAES CALVENTE VERSIEUX
Externo à Instituição - DAIANE CRISTINA FERREIRA GOLBERT - UFRN
Externo à Instituição - MARIE-ANNE VAN SLUYS - USP
Externo à Instituição - TERCILIO CALSA JUNIOR - UFPE