Banca de QUALIFICAÇÃO: RAPHAEL PASCHOAL SERQUIZ

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : RAPHAEL PASCHOAL SERQUIZ
DATA : 29/09/2017
HORA: 13:00
LOCAL: Auditório do Museu de Ciências Morfológicas
TÍTULO:

 

UM INIBIDOR DE TRIPSINA COM ATIVIDADE ESTIMULANTE DA HEPARINA E POTENCIAL ANTI-INFLAMATÓRIO: ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO PARCIAL

PALAVRAS-CHAVES:

Mimosa regnellii; Protease; Anticoagulante; Inflamação; Neutrófilo; Macrófago;

PÁGINAS: 68
RESUMO:

 

Falhas nos mecanismos hemostáticos dos mamíferos contribuem para o desenvolvimento de agravos trombóticos. O fármaco de escolha para o tratamento de tromboses é a heparina, que apresenta efeitos adversos variados quando usado por longos períodos. Alguns pacientes têm demonstrado resistência aos efeitos anticoagulantes da heparina, comumente provocada por carência de antitrombina, um inibidor endógeno da coagulação que tem seu efeito potencializado pela heparina. Diante disso prova-se a necessidade da busca por novas moléculas com potenciais de substituição ou alternação dos tratamentos clínicos já estabelecidos. Inibidores de proteases têm demonstrado eficácia em controlar processos metabólicos dependentes de proteases, como a formação de coágulos, inflamação e mecanismos de morte programada por células diversas. Diante disso, o presente trabalho buscou isolar parcialmente um novo inibidor de tripsina da semente de Mimosa regnellii Benth. (ITJ) e caracterizar sua atividade inibitória para diversas proteases, bem como detectar sua capacidade em interferir no tempo de formação do coágulo na presença e na ausência de heparina ou de bloquear atividades inflamatórias de neutrófilos e macrófagos. ITJ foi parcialmente isolado por cromatografia de afinidade e troca iônica (DEAE), apresentando apenas duas bandas proteicas de 11,9 e 19,2 kDa em eletroforese de gel de poliacrilamida, e foi capaz de inibir tripsina e quimotripsina, porém não apresentou atividade contra elastase humana. Na coagulação, ITJ prolongou o tempo para formação do coágulo, em concentrações superiores à 2µg para cada 100µL de plasma humano no teste APTT. O mesmo efeito não foi observado no teste PT. Quando pré-incubado com heparina o inibidor foi capaz de potencializar em até duas vezes o efeito anticoagulante da heparina tanto no APTT quanto no PT. ITJ induziu a liberação de elastase por neutrófilos humanos de maneira de discreta, porém quando as células foram ativadas com PAF, o inibidor reduziu mais de 40% dos níveis de elastase liberada. O mesmo efeito não foi observado quando os neutrófilos foram ativados com fMLP. Em contato com macrófagos RAW 264.7 e eritrócitos humanos, ITJ não reduziu a viabilidade das células e estimulou a produção de TNF pelos macrófagos sem estimular a produção de óxido nítrico (NO), IL-1, IL-6 ou IL-10. Macrófagos ativados por LPS tiveram redução dos níveis de NO, IL-6 e TNF quando tratados com ITJ, chegando a normalização dos níveis de citocinas em concentrações entre 20-160 µg/mL do inibidor. O inibidor de tripsina de M. regnellii demonstrou-se eficaz como adjuvante do efeito anticoagulante da heparina e promoveu a redução de estímulos inflamatórios de neutrófilos e macrófagos. Técnicas de purificação mais eficazes devem ser empregadas futuramente visando o isolamento total do inibidor e sua caracterização estrutural, além de estudos da interação do inibidor para elucidação do mecanismo de suplementação da heparina.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 2578619 - ANA HELONEIDA DE ARAUJO MORAIS
Externo à Instituição - ARIANE FERREIRA LACERDA - UFRN
Externo à Instituição - PAULA IVANI MEDEIROS DOS SANTOS - IFRN