Banca de QUALIFICAÇÃO: ARIANE FERREIRA LACERDA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: ARIANE FERREIRA LACERDA
DATA: 29/05/2015
HORA: 08:30
LOCAL: Anfiteatro das Aves - Centro de Biociências
TÍTULO:

Avaliação da atividade antimicrobiana das defensinas recombinantes de ervilha (drr230a) e café (cd1) produzidas em Pichia pastoris


PALAVRAS-CHAVES:

Recombinant defensin, Pichia pastoris, Phakopsora pachyrhizi, Fusarium tucumaniae.


PÁGINAS: 139
GRANDE ÁREA: Ciências Biológicas
ÁREA: Bioquímica
SUBÁREA: Biologia Molecular
RESUMO:

A ineficácia de fungicidas nas lavouras e o aumento da incidência de doenças infecciosas resistentes aos antibióticos tem levado a busca por novos compostos antimicrobianos. Neste contexto, defensinas vegetais constitui uma importante ferramenta no controle de agentes patogênicos de plantas e humanos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana de duas defensinas recombinantes contra diferentes espécies de fungos fitopatogênicos e patogênicos ao homem. Inicialmente, genes de defensinas vegetais, nomeadas dr230a (Pisum sativum) e cd1 (Coffea arabica) foram subclonados no vetor de expressão de levedura e expresso em Pichia pastoris. O gene cd1 foi subclonado em duas formas recombinantes, uma delas contendo uma sequência codificante para seis histidinas (6xHis) na região C-terminal do peptídeo, denominada CD1tC e uma outra, cuja proteína resultante possuiria uma sequência codificante para seis histidinas (6xHis) na região N-terminal, sendo então denominada CD1tN. As proteínas recombinantes foram purificadas por cromatografia de afinidade de metal imobilizado (IMAC) associada a cromatografia de fase reversa em coluna C18. A atividade antifúngica contra Phakopsora pachyrhizi foi realizada em dois ensaios. O primeiro com o intuito de analisar a inibição da germinação in vitro de uredosporos de P. pachyrhizi e o segundo para analisar a severidade da doença causada por P. pachyrhizi in planta. A defensina rDrr230a inibiu 100% da germinação de uredosporos de P. pachyrhizi quando testada na concentração de 3 ug/uL. Na mesma concentração, rCD1tC inibiu 26%, enquanto rCD1tN inibiu 18%. Ambas as proteínas recombinantes foram capazes de reduzir substancialmente a severidade da ferrugem da soja, conforme demonstrado em ensaios in planta. Além disso, a rCD1tC na concentração de 52 uM  resultou em 30% de inibição do crescimento do fungo fitopatogênico Fusarium tucumaniae. Nenhuma das formas recombinantes foi capaz de inibir o crescimento dos microorganismos patogênicos humanos. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que tais defensinas vegetais são candidatas úteis para serem utilizadas em programas de engenharia genética de plantas para controlar doenças fúngicas relevantes na agricultura.


MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1549705 - ADRIANA FERREIRA UCHOA
Interno - 1544647 - MATHEUS DE FREITAS FERNANDES PEDROSA
Externo ao Programa - 2085604 - SUSANA MARGARIDA GOMES MOREIRA
Notícia cadastrada em: 26/05/2015 10:52
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