Banca de DEFESA: MICHELLE ROSSANA FERREIRA VAZ

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: MICHELLE ROSSANA FERREIRA VAZ
DATA: 29/12/2011
HORA: 14:30
LOCAL: AUDITÓRIO DO PPGEQ
TÍTULO:

Influência das condições de cultivo na produção do antígeno de Leishmania chagasi utilizando a Escherichia coli como vetor em cultivos realizados em shaker e biorreator.

PALAVRAS-CHAVES:

Proteína. Indução. Leishmaniose visceral.

PÁGINAS: 139
GRANDE ÁREA: Engenharias
ÁREA: Engenharia Química
RESUMO:

Desde o advento da tecnologia do DNA recombinate, a Escherichia coli é um dos hospedeiros mais utilizados para produção proteínas recombinantes tanto em escala de laboratório como em escala industrial. Apesar do avanço expressivo dos estudos da biologia molecular e da imunologia das infecções, não existe, atualmente, nenhuma droga profilática capaz de prevenir o calazar. Desta forma, existe uma grande necessidade de identificação de antígenos específicos para o desenvolvimento de vacinas e kits para diagnósticos contra a Leishmaniose visceral. Com base no exposto, o presente trabalho tem como foco principal avaliar influência das condições de cultivo na produção dos antígenos de leishmania chagasi em cultivos realizados em incubador rotativo (shaker) e biorreator. Para atingir o objetivo proposto, um primeiro conjunto de ensaios foi realizado com o objetivo de avaliar o comportamento cinético dos antígenos (648, 503) de Leishmania chagasi em duas diferentes composições de meio (2xTY, TB), sem adição do indutor. Um segundo conjunto de ensaios foram submetidos a um procedimento de indução por IPTG e posteriormente, por lactose a fim de verificar a influência da adição destes indutores na expressão dos antígenos recombinantes, em incubador rotativo, no sentido de se melhorar a expressão, bem como validar as novas condições de expressão em biorreator de bancada, com o meio de cultivo e clone que apresentaram resultados mais satisfatórios no segundo conjunto de ensaios, nas mesmas condições de temperatura, pH e velocidade de agitação utilizados em incubador rotativo (shaker). Posteriormente, em um quarto conjunto de ensaios avaliou-se a influência da velocidade de agitação no crescimento e na expressão da proteína, utilizando-se o clone que apresentou melhores resultados no terceiro conjunto de ensaios, e o indutor que induziu uma maior expressão de proteína. Com base nos resultados obtidos, pode-se observar que a elevada complexidade do meio de cultivo favoreceu a cinética de crescimento dos clones recombinantes (648, 503), no entanto, ao se tratar dos ensaios submetidos ao procedimento de indução por IPTG, a elevada complexidade do meio de cultivo não favoreceu a expressão das proteínas recombinantes. Pode-se observar que a expressão dos antígenos 648 e 503 apresentam um comportamento associado ao crescimento e que em termos de localização, as proteínas 648 e 503, são armazenadas intracelularmente. A lactose pode ser o indutor mais adequado na expressão das proteínas tendo em vista os fatores, custo, toxicidade e estabilidade. A elevada agitação pode aumentar o crescimento celular do clone 503, entretanto, pode não acarretar em altas concentrações da proteína de interesse. Por outro lado, foram obtidos resultados positivos para todos os clones recombinantes (648, 503) testados, confirmada através do perfil eletroforético.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - ANA LÚCIA FIGUEIREDO PORTO - UFRPE
Externo ao Programa - 2378605 - CRISTIANE FERNANDES DE ASSIS
Externo ao Programa - 1714243 - DANIELLA REGINA ARANTES MARTINS
Interno - 1346198 - EVERALDO SILVINO DOS SANTOS
Presidente - 347401 - GORETE RIBEIRO DE MACEDO
Externo à Instituição - MARIA VALDEREZ PONTE ROCHA - UFC