EFEITO DA ADIÇÃO DE COLESTEROL E ECDISONA NA PRODUÇÃO IN VITRO DO BACULOVÍRUS SPODOPTERA FRUGIPERDA MNPV
Biopesticida, Cultivo de Celulas de Inseto, SfMNPV
Dentre as pragas que atacam a cultura do milho no Brasil, destaca-se a Spodoptera frugiperda (J. E. Smith, 1797) (Lepidoptera: Noctuidae), conhecida como lagarta-do-cartucho, que é a principal praga da cultura do milho. Devido à instabilidade genética durante a passagem seriada de baculovirus em cultivo de células de inseto, o desenvolvimento da produção in vitro de bioinseticidas virais é o maior desafio para a produção massal deste bioproduto. Passagens sucessivas de vírus usando vírus extracelulares (BVs), necessárias para o aumento de escala durante a produção de bioinseticida viral, leva ao aparecimento de formas aberrantes de vírus, processo conhecido como “efeito de passagem”. A principal conseqüência do efeito passagem é a diminuição da produção de corpos de oclusão (OB), inviabilizando economicamente sua produção utilizando o processo in vitro. Neste trabalho, foi realizada a passagem seriada do isolado 18 do baculovirus Spodoptera frugiperda multiple nucleopolyhedrovirus em células Sf21. Foi observada uma queda na produção de OB de 170 para 92 da terceira para quarta passagem. Um planejamento experimental fatorial (22) foi empregado para verificar a influência de duas variáveis de entrada, concentração de hormônio 20- Hidroxiecdisona (CH) e concentração de colesterol (CC), sobre os valores das variáveis de resposta (produção volumétrica e produção específica de OB) do processo, buscando definir as faixas ótimas de operação tentando reverter ou minimizar o efeito passagem. O resultado deste planejamento indicou uma influência negativa da adição do colesterol e positiva na adição de hormônio, onde as faixas ótimas encontradas para as concentrações estudadas foram: 8 a 10µg/mL e 5 a 6,5µg/mL, para as concentrações de colesterol e hormônio, respectivamente. Novos experimentos foram realizados com a adição individual de hormônio e colesterol com a finalidade de verificar influência destes adjuvantes na produção de OB de forma independentemente. Enquanto que o melhor resultado do planejamento obteve uma produção volumétrica de 9,4 x 107 OB/mL e específica de 128,4 OB/célula, com a adição de somente 6μg/mL de 20-Hidroxiecdisona, estas concentrações aumentaram para 1,9 x 108 OB/mL e 182,9 OB/célula, respectivamente, confirmando que a adição do hormônio 20- Hidroxiecdisona aumenta a performance do processo in vitro de produção de SfMNPV em cultivos de células Sf21.