DISCENTE : AQUILES SALES CRAVEIRO SARMENTO
DATA : 09/04/2019
HORA: 13:45
LOCAL: Anfiteatro das Aves
TÍTULO:
Alterações na homeostase redox e do retículo endoplasmático: mecanismos associados à lipodistrofia generalizada congênita do tipo 2
PALAVRAS-CHAVES:
Palavras-Chave: BiP; CHOP; PDI; APE-1; Berardinelli; Estresse Oxidativo
PÁGINAS: 116
RESUMO:
A lipodistrofia generalizada congênita (LGC) do tipo 2 consiste numa rara síndrome autossômica recessiva caracterizada pela quase completa falta de tecido adiposo corporal desde o nascimento. A LGC, genética causada por mutações de perda de função nos dois alelos do gene BSCL2, já foi foi fenotipicamente caracterizada por hipertrigliceridemia, hiperglicemia, aumento do LDL-c, diminuição do HDL-c e hipoadiponectinemia. Esses achados laboratoriais são importantes gatilhos para alterações na homeostase redox e do retículo endoplasmático (RE). Por conseguinte, nosso objetivo foi evidenciar se esses mecanismos intracelulares estariam presentes nessa síndrome. Para tal, coletamos o sangue total de pessoas originárias do Nordeste do Brasil com 0, 1 e 2 alelos mutantes para a mutação 325dupA (rs786205071) no gene BSCL2. Por meio da técnica RTqPCR, avaliamos a expressão de genes responsáveis por desencadear a resposta antioxidante, reparo de DNA e estresse do RE nos leucócitos. Testes colorimétricos foram utilizados para quantificar produtos de peroxidação lipídica e avaliar o status redox da glutationa, bem como acessar o panorama do metabolismo energético do plasma. A PCR convencional também foi escolhida para observação das lesões no DNA das mitocôndrias dos leucócitos. Também escolhemos o imunoblot para o estudo da expressão gênica de proteínas chaperonas relacionadas com o estresse do RE nos leucócitos, bem como das concentrações de adiponectina no plasma. Em relação aos grupos que não apresentavam lipodistrofia, as pessoas com a mutação rs786205071 nos 2 alelos apresentaram aumento da transcrição de NFE2L2, APEX1, OGG1 e αOGG1 nos leucócitos, bem como das concentrações de malondialdeído e da taxa GSSG:GSH no plasma. Além disso, também observamos diminuição da taxa de polimerização in vitro do DNA mitocondrial e aumento do splicing de XBP1 nos leucócitos. As análises in sílico apontaram para alta probabilidade da seipina rs786205071 pertencer à membrana do RE, embora a mutação supracitada remova regiões amiloidogênicas dessa proteína. Ademais, observamos diminuição da transcrição de BSCL2 nesses leucócitos, associado à ausência de diferenças no padrão de expressão das chaperonas HSPA5 e P4HB. Em paralelo, essas células apresentaram diminuição das transcrições de DDIT3, mas sem diferenças no padrão de clivagem da procaspase-3. Por fim, também observamos diminuição das concentrações plasmáticas de adiponectina e do HDLc. Juntos, os resultados apontam para a presença de lesões em lipídeos decorrentes das alterações na homeostase redox, associadas com o aumento do número de danos no DNA mitocondrial e recrutamento transcricional de genes que participam da resposta antioxidante e do reparo do DNA. Embora também haja evidências de estresse do RE, a mutação rs786205071 se mostrou como sendo improvável de gerar diretamente esse mecanismo. Ademais, os dados sugerem que não houve evidências de aumento de morte celular e que as diminuições das concentrações de adiponectina e do HDL-c podem atuar como possíveis gatilhos para as alterações na homeostase redox e do RE na LGC do tipo 2.
MEMBROS DA BANCA:
Externa ao Programa - 2323511 - ADRIANA AUGUSTO DE REZENDE
Externa ao Programa - 1879430 - ANA PAULA TRUSSARDI FAYH
Presidente - 1837354 - JULLIANE TAMARA ARAUJO DE MELO CAMPOS
Externo à Instituição - RENAN MAGALHAES MONTENEGRO JUNIOR - UFC
Interno - 1507794 - RODRIGO JULIANI SIQUEIRA DALMOLIN