Moléculas naturais com ação bioativa, tais como o inibidor de tripsina isolado de sementes de tamarindo (Tamarindus indica L.) (ITT),destaca-se entre os agentes sacietogênicos e anti-inflamatórios estudados na atualidade. Nessa perspectiva, o encapsulamento do ITT em quitosana purificada e a proteína isolada dosoro leite (EQPI) podem ser uma estratégia para prolongar o efeito desse inibidor, visando modular ou potencializar os efeitos bioativos. Para isso,porém, precisa ser avaliada a segurança, visando possíveis aplicações clínicas. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a citoxicidade e toxicidade sanguínea subaguda da dose bioativa do EQPI em ratos Wistar,alimentados com dieta de alto índice glicêmico. O ITT foi obtido com base no fracionamento proteico, utilizando sulfato de amônio. A fração com maior atividade inibitória contra tripsina, fracionamento de 30-60%, foi isolada por Cromatografia de Afinidade em Tripsina-Sepharose, e utilizada para síntese de nanopartículas. O EQPI foi produzido pelo método de nanoprecipitação em solvente orgânico, respeitando a proporção de ITT, quitosana purificada e proteína isolada do soro do leite de 1:2:2 p/p/p, respectivamente. O encapsulado obtido foi caracterizado por diferentes análises físicas e químicas, bem como avaliado quanto à interação entre o ITT e os agentes encapsulantes em pH neutro (água) e em pH ácido, por meio de diversas etapas de filtração em Amicon® 100 K, sendo monitorado pela atividade antitríptica. Adicionalmente, foram avaliadas a citotoxicidade do EQPI em diferentes concentrações (0,5, 2,5 e 5 mg/mL) por meio do ensaio de resazurina, utilizando duas linhagens celulares, (Caco-2 e CCD-18Co), além da toxicidade sanguínea (hemograma, função hepática e renal) em ratos Wistar macho (n = 10), alimentados com dieta de alto índice glicêmico e, administrado com EQPI (12,5 mg/Kg) por 10 dias. O EQPI apresentou partículas esféricas com superfície lisa de acordo com a Microscopia Eletrônica de Varredura, diâmetro médio de 118 nm (17.27), índice depolidispersão de 0.373 (0.02), carga superficial de -38.26 mV (0.15) e eficiência de incorporação de 95.31% (0.31). Quanto à interação em água do ITT e dos agentes encapsulantes por meio da avaliação da atividade antitríptica, utilizando Amicon® 100 K, observou-se que,em água, o EQPI protegeu o ITT e o manteve aprisionado. No entanto, em pH ácido ocorreu uma liberação gradual do ITT;esses resultados foram evidenciados pela forte interação entre o ITT e os agentes encapsulantes, utilizados neste estudo. O ensaio de citotoxicidade apontou alta viabilidade celular (>70%) para Caco-2 e CCD-18Co, quando exposta ao EQPI avaliado em diferentes concentrações. Quanto à toxicidade sanguínea subaguda do EQPI administrado em ratos Wistar, também não foram demonstrados efeitos tóxicos de acordo com os resultados obtidos para os parâmetros bioquímicos avaliados. Neste estudo, o EQPI se mostrou eficiente em proteger o ITT quando disperso em água e exposto ao pH ácido. As concentrações de EQPI, avaliadas em células e no modelo experimental, não demonstraram sinais de toxicidade, sugerindo a aplicação segura dessas partículas e provável efeito hepatoprotetor. Assim, assegurou a sua aplicação em estudos complementares para investigar a eficácia no tratamento da obesidade e suas complicações.